蛋白質(zhì)測序：技術(shù)方法和應(yīng)用檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

dànbáizhì是細(xì)胞活動的執(zhí)行者，其功能取決于jīngquè的氨基酸序列。一旦序列發(fā)生改變，蛋白的結(jié)構(gòu)、相互作用和生物學(xué)功能都可能受到顯著影響。dànbáizhì測序（Protein Sequencing）不僅有助于解析蛋白功能機(jī)制，更在疾病研究、抗體開發(fā)、新藥靶點(diǎn)篩選等方面發(fā)揮著基礎(chǔ)性作用。自20世紀(jì)中期以來，dànbáizhì測序技術(shù)不斷進(jìn)化，從Edman降解法走向高通量質(zhì)譜平臺，覆蓋能力與數(shù)據(jù)精度顯著提升，正逐漸成為現(xiàn)代dànbáizhì組學(xué)研究的核心手段。

一、dànbáizhì測序的主流技術(shù)方法

1、Edman降解

Edman降解是一種順序性地從N-末端逐個切割氨基酸的化學(xué)測序法，適用于小肽或純化蛋白。反應(yīng)原理是利用苯異硫氰酸（PITC）選擇性標(biāo)記并釋放N端氨基酸殘基，然后通過色譜手段進(jìn)行鑒定。

??技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：

• 高精度

• 單一序列解析，適合dànbáizhìN端驗(yàn)證

??主要局限：

• 不能處理復(fù)雜混合樣本

• jǐnxiàn于N端分析，無法揭示翻譯后修飾

• 通量低，已不適合大規(guī)模蛋白組研究

盡管在高通量質(zhì)譜出現(xiàn)后應(yīng)用大幅減少，Edman降解仍被用于某些N端封閉驗(yàn)證或重組蛋白鑒定場景中。

2、質(zhì)譜法

當(dāng)前dànbáizhì測序主要依賴質(zhì)譜法（Mass Spectrometry, MS），通過對蛋白樣本進(jìn)行酶解后，在高分辨質(zhì)譜平臺上分析其肽段碎片譜圖，推斷出蛋白的一級結(jié)構(gòu)信息。

??常用質(zhì)譜測序策略：

（1）基于數(shù)據(jù)庫的測序（Database-dependent sequencing）

這是通過將MS/MS譜圖與已知蛋白數(shù)據(jù)庫中理論肽段匹配，從而確定蛋白序列的方法。

?流程特點(diǎn)：

• 高效、自動化程度高

• 依賴高質(zhì)量數(shù)據(jù)庫（如UniProt、NR、Swiss-Prot）

• 可結(jié)合肽段定量（如TMT/iTRAQ）

常用算法工具包括：Mascot、Sequest、MaxQuant、Proteome Discoverer。

（2）De novo測序（無數(shù)據(jù)庫依賴）

當(dāng)研究對象缺乏可靠參考數(shù)據(jù)庫，或希望發(fā)現(xiàn)未知突變、變異肽段時，de novo測序成為shǒuxuǎn方法。該方法直接從MS/MS譜圖推斷氨基酸序列，不依賴已有數(shù)據(jù)庫。當(dāng)前主流的de novo工具包括：PEAKS、Novor、pNovo、DeepNovo等。

（3）頂端下游整合策略（Top-down vs. Bottom-up）

質(zhì)譜測序常按分析方式分為：

• Bottom-up（自下而上）：將蛋白酶解成肽段后進(jìn)行質(zhì)譜分析，是目前zuì主流方式。優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、通量大，適合復(fù)雜樣本。

• Top-down（自上而下）：直接分析完整蛋白分子的質(zhì)譜行為，可提供更豐富的結(jié)構(gòu)修飾信息，但對儀器分辨率要求更高，適用于結(jié)構(gòu)蛋白、變體蛋白等。

二、dànbáizhì測序的應(yīng)用場景

1、生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)

通過比較不同狀態(tài)（如健康與疾病、處理組與對照組）樣本中dànbáizhì序列的變化，可識別出疾病相關(guān)突變肽段、新抗原、剪接變體等潛在生物標(biāo)志物。

2、疾病機(jī)制研究

dànbáizhì序列的變異或翻譯后修飾是多種疾病發(fā)生發(fā)展的核心因素。通過dànbáizhì測序可揭示：

• 激酶調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的磷酸化位點(diǎn)

• 組蛋白修飾（乙?；?、甲基化）與基因表達(dá)關(guān)系

• RNA剪接變異引發(fā)的結(jié)構(gòu)功能異常

3、抗體測序與生物藥開發(fā)

dànbáizhì測序在抗體類生物藥研發(fā)中扮演關(guān)鍵角色，主要應(yīng)用于：

• 抗體序列確認(rèn)（重鏈/輕鏈識別）

• 穩(wěn)定性分析（序列微差識別、點(diǎn)突變檢測）

• 雜質(zhì)蛋白檢測（免疫原性控制）

4、非模式生物和新物種研究

對于缺乏基因組信息的非模式生物，質(zhì)譜結(jié)合de novo測序可直接獲取關(guān)鍵蛋白序列信息。典型應(yīng)用包括：

• 農(nóng)業(yè)生物種質(zhì)資源篩選

• 海洋生物功能蛋白發(fā)掘

• 昆蟲、微生物天然產(chǎn)物酶活研究

5、PTM位點(diǎn)識別與功能研究

翻譯后修飾（Post-Translational Modifications）是調(diào)控蛋白功能的核心機(jī)制。常見修飾包括：

• 磷酸化（Phosphorylation）

• 乙酰化（Acetylation）

• 泛素化（Ubiquitination）

• 糖基化（Glycosylation）

通過特異富集策略結(jié)合質(zhì)譜測序，研究者可在全蛋白水平上定位修飾位點(diǎn)、定量修飾程度，從而揭示復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。

dànbáizhì測序作為連接基因信息與蛋白功能的橋梁，了解其包含的技術(shù)方法和應(yīng)用領(lǐng)域是bìbùkěshǎo的。百泰派克生物科技致力于打造“從樣本到數(shù)據(jù)”的一站式蛋白測序解決方案，依托優(yōu)良儀器平臺與經(jīng)驗(yàn)豐富的質(zhì)譜團(tuán)隊(duì)，為科研與產(chǎn)業(yè)客戶提供高質(zhì)量、可溯源的測序服務(wù)，助力每一個生物發(fā)現(xiàn)更進(jìn)一步。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭?xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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