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  摘要  

    在分析方法考察過程中，化學(xué)家經(jīng)常評估純化過程化合物在不同色譜柱下的化學(xué)特性，例如，對于手性化合物的純化，通常在高效液相色譜分析中篩選幾種類型的色譜柱，盡管不同類型的色譜柱，有著很大的化學(xué)差異性，盡管ACCQ Prep制備色譜系統(tǒng)上可以安裝、使用各種類型色譜柱，ACCQ Prep可以通過只需對一種類型的色譜柱單次校準(zhǔn)計算出聚焦梯度，該校準(zhǔn)不局限于單個色譜柱，通用校準(zhǔn)也可以用于不同化學(xué)特性的色譜柱，只要分析型色譜柱有相同的尺寸和使用相同的梯度和流速，就允許快速和簡便的色譜方法篩選。
 

• 背景

    許多實驗室，例如那些進(jìn)行手性物質(zhì)純化的實驗室，使用多種類型的色譜柱和溶劑進(jìn)行方法開發(fā)，一般從對保留時間和分離度的初步評估開始，然后，偵測運行可以用來創(chuàng)建ACCQ Prep聚焦梯度的高效液相色譜制備方法，色譜柱安裝后，ACCQ Prep制備型HPLC的PeakTrak®軟件具有內(nèi)置校準(zhǔn)、計算偵測方法，這種內(nèi)置校準(zhǔn)的工作適用于所有色譜柱，無論色譜柱的制造商。ACCQPrep外部HPLC校準(zhǔn)同樣可以用于各種類型色譜柱，只要分析柱的尺寸相同，并且使用相同的梯度。

• 實驗和結(jié)果

C18色譜柱運行與C8色譜柱校準(zhǔn)

    通用測試混合物(PN 60-5234-835)在RediSep® C8制備色譜柱(20x150mm,5µ,200Å,PN 69-2203-858)上運行，使用甲醇/水溶劑系統(tǒng)，得到第一個保留時間在6min的洗脫峰，如在Teledyne ISCO 網(wǎng)站Technical Note 52 (TN52)所述的《校準(zhǔn)分析型HPLC系統(tǒng)》。

   相匹配的C8 UHPLC色譜柱(2x50 mm, PN 69-2203- 853)在水/甲醇體系中運行(5min 5 - 100% B，在100%甲醇下等度保持2.5min)，峰洗脫時間為3.757min，對應(yīng)于ACCQPrep上的峰洗脫時間為6min。

• 制備色譜運行

    C8分析柱更換為RediSep Prep UHPLC C18分析柱(2x50 mm, PN 69-2203-854)，測試混合物在水/甲醇梯度中運行，梯度與C8柱相同。正如預(yù)期的那樣，由于C18色譜柱填料100Å孔徑使得保留增加，化合物在梯度中較晚被洗脫。

    使用C18分析運行的數(shù)據(jù)計算圖2中的制備型梯度，同時使用圖1中的C8色譜柱的校準(zhǔn)。制備純化是采用RediSep Prep C18柱(20x150 mm, 5µ，100Å， PN 69-2203-810)。兩種情況下，化合物洗脫時間都接近預(yù)期的6分鐘洗脫時間。

    同時在C8制備型高效液相色譜柱上運行測試混合物，并進(jìn)行C8校準(zhǔn)；利用圖1中的分析數(shù)據(jù)計算第2洗脫峰在4.451min時的梯度。

    色譜圖看起來與C18柱幾乎相同，區(qū)別是由于兩色譜柱之間的保留差異聚焦梯度開始和結(jié)束的溶劑組成不同。

硅膠色譜柱運行與C18校準(zhǔn)

    4.6 × 150 mmRediSep Prep C18柱在AgilentHPLC分析系統(tǒng)上進(jìn)行校正，如TN52中所述，梯度6min內(nèi)從5到100%甲醇，然后以1.0mL/min的流速100%甲醇保持6min。溶劑改為正己烷/乙酸乙酯，色譜柱改為4.6 × 150 mm RediSep Prep硅膠柱。同樣的梯度法用于新溶劑體系和色譜柱，梯度6min內(nèi)5至100%乙酸乙酯，將methyl paraben樣品注入，在20x150mm的RediSep Prep硅膠柱上，在正己烷/乙酸乙酯中進(jìn)行聚焦梯度的保留時間如圖4所示，樣品在計算梯度的中間附近被洗脫。

• 結(jié)論

    在PeakTrak聚焦梯度生成中，對于某類化學(xué)特性的色譜柱校準(zhǔn)可用于另一類化學(xué)特性的色譜柱，這允許在選擇分析、制備系統(tǒng)色譜柱的更多靈活性，并確保適當(dāng)?shù)目蓴U(kuò)展性。

    遵循一個簡單的規(guī)則，在使用外部HPLC分析柱的長度和內(nèi)徑尺寸相同情況下，然后運行具有相同的梯度和流量。這允許用戶使用分析型HPLC偵測運行不同的色譜柱和溶劑系統(tǒng)，以確定具有較高樣品承載能力的佳凈化方法。

ACCQ Prep HP150 高壓制備型HPLC色譜系統(tǒng)

    HP150直觀、易于使用、簡單純化設(shè)計理念，用戶界面友好，消除了普通高效液相色譜系統(tǒng)中不必要的和復(fù)雜的參數(shù)設(shè)置。提高高效液相制備色譜性能和準(zhǔn)確性，提高純化樣品回收率。內(nèi)置餾分收集器和集成觸摸屏，緊湊設(shè)計節(jié)省空間，HP150系統(tǒng)技術(shù)特點：

• 流速1-150 mL/min開發(fā)分析方法和制備方法

• 操作壓力可達(dá)6000 psi

• UV或UV/VIS基礎(chǔ)上選擇ELSD和MS檢測器

• 一鍵生成聚焦優(yōu)化梯度

• 純化時間小化，提高樣本回收率

• 高壓液相制備色譜儀

  前處理設(shè)備在線詢價