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1.背景

苯并（a）芘（benzo（a）pyrene，BaP），又名3,4-苯并芘，結(jié)構(gòu)式如下圖1所示，屬于多環(huán)芳烴中的一種。苯并（a）芘是強(qiáng)致癌物，被世衛(wèi)組織定為1類致癌物。

食品中的苯并（a）芘來源比較復(fù)雜，主要有熏烤、高溫油炸、包裝材料污染和食品加工過程污染等。食用油中的苯并（a）芘主要來源有原材料帶入和加工過程產(chǎn)生。原材料帶入主要包含原材料種植區(qū)受到工業(yè)污染，在柏油馬路上晾曬油料作物，以及長途運(yùn)輸過程環(huán)境污染物浸入和包裝容器遷移等。加工過程產(chǎn)生主要包含油料高溫烘烤等工藝處理過程和浸出工藝中溶劑殘留等。

將實施的《GB 2762-2022 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中污染物限。量》中規(guī)定，食用油中苯并（a）芘限。量為10 µg/kg。 本實驗參考《GB 5009.27-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯并(a)芘的測定》，采用青島盛瀚的高效液相色譜L-3000系列，對食用油中苯并（a）芘的液相色譜測定法進(jìn)行方法驗證。

2.  儀器和設(shè)備

表1 食品中苯并（a）芘的檢測所需液相色譜儀器配置

圖2 盛瀚L-3000液相色譜儀

表2 食品中苯并（a）芘的檢測所需前處理設(shè)備

3. 實驗方法

3.1試劑和材料

除非另有說明，所用試劑均為優(yōu)級純。

乙腈、甲醇、正己烷：色譜純。

水：超純水（18.2 MΩ•cm）。

凈化柱：中性氧化鋁柱22g/60mL

3.2標(biāo)準(zhǔn)溶液

苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)儲備液（100 mg/L）：自購100 mg/L苯并（a）芘乙腈標(biāo)準(zhǔn)溶液。

苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)中間液（1.0 mg/L）：吸取0.1 mL苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)儲備液（100 mg/L）于10 mL容量瓶，乙腈定容混勻備用。

苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)工作液：把苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)中間液（1.0 mg/L）用乙腈稀釋得到0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)曲線，現(xiàn)用現(xiàn)配。

3.3樣品的制備

提?。悍Q取0.4 g（A：0.4032 g，B：0.4014 g），加入5 mL正己烷，渦旋30 s，待過柱。

凈化：中性氧化鋁柱用30 mL正己烷活化，棄去不要。然后加入提取液，并用茄形瓶收集，再用50 mL正己烷洗脫，繼續(xù)收集凈化液。

濃縮：將凈化液40℃旋蒸至1-2 mL，轉(zhuǎn)移至離心管，用正己烷洗滌茄形瓶2次，洗滌液同樣轉(zhuǎn)移至離心管，40℃氮吹近干，0.4 mL乙腈渦旋復(fù)溶，過0.45 μm濾膜，上機(jī)檢測。

4. 色譜條件

流動相：水：乙腈=12：88；

流速：1.0 mL/min；

色譜柱：Shinesil-C18 4.6×250，5μm；

柱溫：35℃；

檢測波長：激發(fā)波長384 nm，發(fā)射波長406 nm；

進(jìn)樣量：20 μL。

5. 實驗結(jié)果

5.1典型譜圖

圖3  1.0 ng/mL苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)溶液

5.2校準(zhǔn)曲線

0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL的苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)工作液線性方程：Y=216.17653X-5.92576。相關(guān)因子：R=0.9999934。

圖4 苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)曲線

5.3重復(fù)性測試

苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 ng/mL）系統(tǒng)適應(yīng)性測試（SST）結(jié)果如下圖，保留時間RSD=0.08%，峰面積RSD=0.95%。

圖5 苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 ng/mL）系統(tǒng)適應(yīng)性測試（SST）結(jié)果

5.4實際樣品測定

花生油樣品苯并（a）芘測試色譜圖及上機(jī)檢測結(jié)果如下所示。

表3 食品中苯并芘的檢測所需前處理設(shè)備

圖6 實際樣品苯并（a）芘測試譜圖

平行樣品的絕對差值為0.022 μg/kg，與平行樣品算數(shù)平均值的比值為2.74%，小于20%，符合《GB 5009.27-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯并（a）芘的測定》的要求。

6. 結(jié)論

上述實驗結(jié)果表明，采用盛瀚L-3000高效液相色譜儀，苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度范圍在0.5 ng/mL~20.0 ng/mL內(nèi)，具有很好的線性，線性相關(guān)系數(shù)為0.9999934，定性定量重復(fù)性良好，可滿足《GB 5009.27-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯并（a）芘的測定》要求。