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1 背景

亞硝酸鹽和硝酸鹽是常見致癌物，過量攝入會(huì)影響人體健康，造成中毒，導(dǎo)致嬰幼兒高鐵血紅蛋白癥，孕婦流產(chǎn)、高血壓、甲狀腺腫大等。除此之外，亞硝酸鹽和硝酸鹽可在人體內(nèi)合成具有強(qiáng)致癌作用的亞硝胺類化合物。

奶粉是嬰幼兒主要食物來源之一。其食品衛(wèi)生安全性必然受到人們的廣泛關(guān)注。若攝入的奶粉中亞硝酸鹽的含量超標(biāo)，會(huì)對嬰幼兒身體健康產(chǎn)生較大威脅。乳及乳制品中亞硝酸鹽和硝酸鹽主要來源于飼料、飼養(yǎng)環(huán)境、生產(chǎn)用水及人為摻雜所致。

GB 2762-2022《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中污染物限。量》標(biāo)準(zhǔn)中對嬰幼兒配方奶粉中的亞硝酸鹽、硝酸鹽含量要求非常嚴(yán)格，限值分別為2.0 mg/kg、100 mg/kg。因此，準(zhǔn)確測定奶粉中的硝酸鹽與亞硝酸鹽的含量對于奶制品的食品安全具有重要意義。

本方案參考國家強(qiáng)制標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.33-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》中的第一法-離子色譜法，采用盛瀚新一代D120+離子色譜，對奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽進(jìn)行檢測，結(jié)果滿足國標(biāo)要求，且準(zhǔn)確高效，靈敏度和重復(fù)性好。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1試劑和材料

除非另有說明，所用試劑均為優(yōu)級純。

水：超純水（18.2 MΩ•cm）。

凈化柱：SHINE C18柱（1cc），SHINE Ag柱（1cc），SHINE Na柱（1cc）

2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液

亞硝酸根標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100 mg/L）：準(zhǔn)確稱取0.0150g亞硝酸鈉，用水稀釋定容于100 mL容量瓶中，混勻備用。

硝酸根標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000 mg/L）：市售標(biāo)準(zhǔn)溶液。

亞硝酸根和硝酸根混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（NO2-：1.0 mg/L，NO3-：10.0 mg/L）：準(zhǔn)確移取亞硝酸根和硝酸根標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各1.0 mL于100 mL容量瓶，用水定容至刻度，混勻備用。

亞硝酸根和硝酸根混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：由亞硝酸根和硝酸根混合標(biāo)準(zhǔn)中間液用水稀釋得到亞硝酸根濃度為0.02 mg/L、0.04 mg/L、0.06 mg/L、0.08 mg/L、0.10 mg/L、0.20 mg/L，硝酸根濃度為0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L標(biāo)準(zhǔn)曲線，現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.3樣品的制備

提?。悍Q取2.5 g（精確到0.01 g）樣品，置于100 mL具塞錐形瓶中，加水約80mL，搖勻，超聲30 min，取出放置至室溫，定量轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，加入3 %乙酸溶液2 mL，于4℃放置20 min，取出放置至室溫。溶液經(jīng)濾紙過濾，取上清液備用。

凈化：取上述備用的上清液約15 mL，通過0.45 μm水性濾膜針頭過濾器、C18柱，棄去前面3 mL（如果氯離子大于100 mg/L，則需要依次通過針頭濾器、C18柱、Ag柱和Na柱，棄去前面7 mL。對于氯離子含量不高的樣品，不建議使用Ag柱和Na柱。因?yàn)锳g柱是優(yōu)先去除氯離子，但是當(dāng)氯離子含量不高時(shí)，剩余的Ag離子會(huì)吸附亞硝酸根離子，導(dǎo)致其回收率偏低。），收集后面洗脫液待測。

凈化小柱使用前需進(jìn)行活化，活化過程為：C18柱（1.0cc）使用前依次用10 mL甲醇、15 mL水通過，靜置活化30 min。Ag柱（1.0cc）和Na柱（1.0cc）用10 mL水通過，靜置活30 min。

3 色譜條件

淋 洗 液：

0-20 min，10 mM KOH

20-35 min，50 mM KOH

35-40 min，10 mM KOH；

流    速：1.0 mL/min；

色 譜 柱：SH-AS19；

柱    溫：30℃；

抑制電流：125 mA；

進(jìn) 樣 量：50 μL。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1校準(zhǔn)曲線

標(biāo)準(zhǔn)曲線譜圖和線性方程如下，NO2-在0.02-0.20 mg/L范圍內(nèi)，NO3-在0.2-2 mg/L范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)均大于0.999，線性良好。

4.2重復(fù)性測試

將亞硝酸根和硝酸根混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.02 mg/L和0.2 mg/L）連續(xù)進(jìn)樣7次，系統(tǒng)適應(yīng)性測試（SST）結(jié)果如下圖，保留時(shí)間RSD=0.02%，峰面積RSD≤0.67%，方法具有很好的重復(fù)性。

4.3實(shí)際樣品測定

奶粉樣品中亞硝酸鹽、硝酸鹽測試結(jié)果如下所示，NO2-未檢出，未列表格。

NO3-測試結(jié)果：

樣品中添加0.06 mg/L亞硝酸根、0.6 mg/L硝酸根濃度水平標(biāo)準(zhǔn)溶液，測試結(jié)果如下，亞硝酸根和硝酸根回收率符合要求。

NO2-加標(biāo)測試結(jié)果：

NO3-加標(biāo)測試結(jié)果：

樣品加標(biāo)測試譜圖：

5 結(jié)論

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用盛瀚新一代D120+離子色譜儀，亞硝酸鹽和硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液具有很好的線性，定性定量重復(fù)性好，滿足《GB 5009.27-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》要求。