高效液相色譜系統(tǒng)的有效運(yùn)行取決于流動(dòng)相和樣品不受化學(xué)雜質(zhì)或固體懸浮液的影響。HPLC流動(dòng)相處理和使用中的注意事項(xiàng)討論了流動(dòng)相制備和使用過(guò)程中應(yīng)采取的措施。樣品過(guò)濾的重要性討論了清潔樣品進(jìn)樣的好處。
高效液相色譜柱是高效液相色譜系統(tǒng)的關(guān)鍵部件，需要小心處理和保護(hù)。經(jīng)常更換色譜柱是很昂貴的，因此您的目標(biāo)應(yīng)該是*大限度地延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，以便每次都能獲得所需的準(zhǔn)確度和一致性結(jié)果。
由于雜質(zhì)和懸浮液的逐漸累積，HPLC柱的色譜行為在使用過(guò)程中開(kāi)始下降。流動(dòng)相或樣品中大于2μm的顆粒開(kāi)始沉積在柱的入口玻璃料上，從而干擾流動(dòng)的均勻性。較小的顆粒會(huì)導(dǎo)致背壓增加，因此它們開(kāi)始阻塞固定相的流動(dòng)路徑。
污染物的性質(zhì)
·反相分離中高度保留的化合物，如脂肪酸
·不可逆保留的化合物，如殘留的蛋白質(zhì)，在樣品提取時(shí)未完·全去除。強(qiáng)烈建議在HPLC分析之前對(duì)生物液體中的蛋白質(zhì)進(jìn)行脫蛋白處理。
·顆粒雜質(zhì)可能是由于樣品未過(guò)濾，系統(tǒng)部件（如泵或噴油器中的密封件）磨損而釋放的顆粒。
·柱內(nèi)殘留緩沖液干燥產(chǎn)生的結(jié)晶沉積物。使用后用HPLC級(jí)水或緩沖溶液清洗色譜柱可防止此類(lèi)鹽沉積的形成。
什么是保護(hù)柱？
保護(hù)柱是安裝在進(jìn)樣器和分析柱之間的保護(hù)柱或小柱。 它用于去除到達(dá)分析柱的雜質(zhì)和懸浮固體。 通常它具有大約 2 厘米的長(zhǎng)度和 4.6 毫米的內(nèi)徑。 保護(hù)柱填充有約 40 μm 大小的片狀顆粒，壓降可忽略不計(jì)。
護(hù)柱的理想特性
·保護(hù)柱最好具有與分析柱相同的填料，以消除分離并發(fā)癥
·護(hù)柱的內(nèi)部ID應(yīng)與分析柱相當(dāng)，以將背壓降至最·低。較短的保護(hù)柱長(zhǎng)度是可取的，但其長(zhǎng)度應(yīng)足以防止強(qiáng)烈保留的化合物到達(dá)主柱
·面向注入器的熔塊應(yīng)可移除，以便通過(guò)移除約2 mm的材料并填充新材料進(jìn)行清潔
·與可重新填充的防護(hù)柱相比，一次性盒式防護(hù)柱使用方便且經(jīng)濟(jì)。
需要定期更換保護(hù)柱，但通過(guò)觀察色譜行為的變化，如背壓增加、峰加寬和峰保留時(shí)間的變化，需要進(jìn)行中間更換。然而，變化頻率可根據(jù)樣品的化學(xué)成分、高保留或不可逆保留成分的存在、進(jìn)樣量或進(jìn)樣次數(shù)來(lái)確定。
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