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在mRNA疫苗的研究中，液相分析是一種常用的檢測手段。然而，由于mRNA含有磷酸基團(tuán)，使用常規(guī)液相分析時(shí)很容易與金屬管路發(fā)生吸附，導(dǎo)致結(jié)果重復(fù)性差、殘留量高、無法準(zhǔn)確分析等問題。目前常用的解決方法是使用高濃度mRNA疫苗樣品連續(xù)多次進(jìn)樣，對管路進(jìn)行飽和處理，等待峰面積穩(wěn)定后再進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。然而，這種方法仍然存在一些問題，如進(jìn)樣殘留、耗時(shí)、樣品浪費(fèi)等。

為了解決金屬吸附現(xiàn)象并獲得穩(wěn)定的結(jié)果，成為mRNA疫苗液相分析中的關(guān)鍵挑戰(zhàn)。島津推出了生物惰性超高效液相色譜Nexera XS inert系統(tǒng)，采用無金屬樣品流路，在耐高壓的同時(shí)，具有出色的抗吸附能力，能夠有效解決mRNA疫苗液相分析中吸附殘留等難題。本文將介紹使用該系統(tǒng)開發(fā)mRNA疫苗檢測分析的方法，無需飽和吸附、額外清洗，即可獲得穩(wěn)定、高效、低殘留的檢測結(jié)果。

使用設(shè)備：Nexera XS inert生物惰性超高效液相色譜

流動(dòng)相A：0.1mmol/L三乙基乙酸銨：異丙醇（900:22.5, v:v）

流動(dòng)相B：0.1mmol/L三乙基乙酸銨：乙腈：異丙醇（600:200:20, v:v:v）

洗脫方式：梯度洗脫

其他參數(shù)：略

使用以上條件，分析得到mRNA疫苗供試品的典型色譜圖如下

mRNA疫苗供試品色譜圖

為了驗(yàn)證Nexera XS inert系統(tǒng)針對mRNA疫苗中金屬吸附分子的抑制效果，平行進(jìn)樣6次，進(jìn)行重復(fù)性的考察。結(jié)果見下表，保留時(shí)間RSD值0.08%，峰面積RSD值1.09%，表明Nexera XS inert系統(tǒng)分析mRNA疫苗重復(fù)性良好。

mRNA疫苗供試品重復(fù)性驗(yàn)證結(jié)果（n=6）

為了驗(yàn)證進(jìn)樣殘留，使用常規(guī)液相與Nexera XS inert系統(tǒng)進(jìn)樣對比，采用mRNA疫苗供試品進(jìn)樣7針后，再連續(xù)分析3針空白溶劑的方法去評(píng)估殘留。對比結(jié)果見下圖，Nexera XS inert系統(tǒng)在多次進(jìn)樣后，殘留低于常規(guī)液相，第1-3針空白的殘留分別為0.69%、0.43%、0.28%，殘留水平滿足mRNA疫苗分析要求。

常規(guī)液相和生物惰性液相mRNA疫苗供試品分析對比圖

總結(jié)

本文采用島津Nexera XS inert生物惰性超高效液相建立了一種用于分析mRNA疫苗樣品的方法。經(jīng)過重復(fù)性和殘留量的考察，該系統(tǒng)在無需進(jìn)行預(yù)飽和處理的情況下，直接進(jìn)行樣品分析后，mRNA目標(biāo)成分的保留時(shí)間和峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.08%和1.09%；無需進(jìn)行額外的殘留處理，三個(gè)空白溶劑的殘留量分別為0.69%、0.43%和0.28%；以上結(jié)果表明，該方法滿足mRNA疫苗重復(fù)性和殘留量的檢測要求，為mRNA疫苗檢測分析提供穩(wěn)定、高效、低殘留的檢測結(jié)果。

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