Q1: 什么是內(nèi)毒素？

A1: 內(nèi)毒素是一種復(fù)雜的脂多糖（LPS），存在于大多數(shù)致病性革蘭氏陰性細(xì)菌的外膜上。雖然煮沸 30 分鐘不會(huì)破壞內(nèi)毒素的穩(wěn)定性，但某些強(qiáng)氧化劑（如超氧化物、過氧化物和次氯酸鹽）可以降解內(nèi)毒素。

Q2: 可接受的最大內(nèi)毒素劑量是多少？

A2: 1 EU 大約相當(dāng)于 100 pg 的大腸桿菌脂多糖--大約 105 個(gè)細(xì)菌中的含量。人類只要接觸到5 EU/1kg 的內(nèi)毒素，就會(huì)出現(xiàn)癥狀。這些癥狀包括但不限于發(fā)燒、低血壓、心率加快和尿量少。即使血液中含有小劑量的內(nèi)毒素，也往往是致命的。

FDA對(duì)在美國(guó)銷售的藥品規(guī)定了以下最高允許內(nèi)毒素含量：

1.藥物（可注射，鞘內(nèi)注射）- 0.2 EU/1kg體重

2.藥物（可注射，非鞘內(nèi)注射）--5 EU/1kg體重

3.無菌水 - 0.25-0.5 EU/ml（取決于預(yù)期用途）

Q3: 我應(yīng)該選擇哪種內(nèi)毒素檢測(cè)方法？

A3: 在決定使用哪種內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒之前，您需要考慮幾個(gè)問題。首先，您要檢測(cè)多少樣本，檢測(cè)頻率如何？如果您只檢測(cè)一兩個(gè)樣品，而且只檢測(cè)一次，那么您可以考慮內(nèi)毒素檢測(cè)服務(wù)機(jī)構(gòu)。如果您計(jì)劃定期檢測(cè)，那么您首先需要評(píng)估您目前擁有的設(shè)備。如果您有多種可用設(shè)備，請(qǐng)考慮您希望獲得的結(jié)果類型。如果您必須獲得定量結(jié)果，那么凝膠法試劑盒將無法滿足您的需求，因?yàn)槟z法檢測(cè)只能得出定性的結(jié)果。檢測(cè)靈敏度是另一個(gè)重要的考慮因素。Kinetic-QCL™ 動(dòng)態(tài)顯色 LAL 檢測(cè)法和 PyroGene™ 重組因子 C 檢測(cè)法的靈敏度都可低至 0.005 EU/mL。PYROGENT™-5000動(dòng)態(tài)濁度LAL測(cè)定的讀數(shù)可達(dá)0.01 EU/mL。PYROGENT™凝膠法檢測(cè)試劑盒可訂購不同靈敏度的產(chǎn)品： 0.03、0.06、0.125 和 0.25 EU/mL。如果您需要經(jīng)常檢測(cè)許多樣品，那么您可能需要考慮購買尚未擁有的設(shè)備和軟件。與PYROGENT™凝膠法相比，光度法和重組C因子法所需的上手操作時(shí)間更短，靈敏度更高。

Q4: 進(jìn)行 Lonza 細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè) (BET)、LAL 或 PyroGene™ 重組因子 C (rFC) 內(nèi)毒素檢測(cè)需要哪些設(shè)備？

A4: 不同的內(nèi)毒素檢測(cè)方法需要使用的設(shè)備可能也不同。如果使用PYROGENT™ 凝膠法檢測(cè)，需要一個(gè)非循環(huán)水浴鍋或一個(gè)能在 37°C 下加熱的干熱塊。如果Kinetic-QCL™ 或 PYROGENT™-5000檢測(cè)，則需要吸光度酶標(biāo)儀和內(nèi)毒素檢測(cè)分析軟件，該酶標(biāo)儀應(yīng)具有振蕩功能，能在 37°C 下孵育整個(gè)檢測(cè)過程，并能在 405 nm（用于 Kinetic-QCL）或 340 nm（用于 PYROGENT™-5000）波長(zhǎng)下讀取動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)。如果使用PyroGene™ rFC 檢測(cè)，則需要使用配有 380/440 nm濾光片的孵育熒光酶標(biāo)儀。我們的所有試劑盒都需要使用漩渦混合器和標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室移液器。

Q5: 在進(jìn)行 Lonza 細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè) (BET)、LAL 或 PyroGene™ 重組因子 C (rFC) 內(nèi)毒素檢測(cè)試驗(yàn)時(shí)，為什么要使用玻璃配件而不是塑料？

A5: 內(nèi)毒素在塑料表面的附著力比玻璃表面強(qiáng)。因此，我們建議在配制內(nèi)毒素對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)（CSE）稀釋液時(shí)使用硼硅酸鹽玻璃稀釋管。在某些情況下，某些塑料可能被證明是可以接受的樣品容器。雖然玻璃仍是樣品容器材料，但聚苯乙烯可能是第二選擇，聚丙烯則是第三選擇。一些客戶也表示使用 PET 材料效果不錯(cuò)。如果您計(jì)劃在檢測(cè)前將樣品保存一段時(shí)間，則應(yīng)驗(yàn)證樣品是否能在您計(jì)劃使用的容器中保存，并確認(rèn)樣品中的任何內(nèi)毒素在保存后都能被回收。

Q6: 在使用 Lonza 細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒 (BET)、LAL 或 PyroGene™ 重組因子 C (rFC) 進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)時(shí)，為什么要對(duì)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素 (CSE) 對(duì)照稀釋液進(jìn)行渦旋處理？

A6: 內(nèi)毒素會(huì)附著在玻璃表面，可以通過適當(dāng)?shù)臏u旋來復(fù)溶，以確保等分到反應(yīng)管或微孔板中的溶液濃度正確。在稀釋之前，應(yīng)將CSE小瓶渦旋15 分鐘。每次使用小瓶時(shí)都應(yīng)重復(fù)此操作，而不僅僅是在復(fù)溶后。每次使用 CSE 稀釋液前應(yīng)至少渦旋 1 分鐘。使用前最好立即將 CSE 稀釋液渦旋幾秒鐘。

Q7: 進(jìn)行 Lonza 細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè) (BET)、LAL 或 PyroGene™ 重組因子 C (rFC) 內(nèi)毒素檢測(cè)時(shí)，如何將 EU/ml（內(nèi)毒素單位）轉(zhuǎn)換為 ng/ml？

A7: 根據(jù)內(nèi)毒素來源的不同，從EU/ml到納克的換算也會(huì)有所不同。FDA最初將內(nèi)毒素單位(EU)定義為參考內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)EC-2中0.2 ng或5 EU/ng的內(nèi)毒素活性。將現(xiàn)行FDA RSE, EC-6從EU轉(zhuǎn)換為ng，轉(zhuǎn)換量為10 EU/ng。以前版本的BET<85>USP中規(guī)定，合適的CSE效價(jià)在2至50 EU/ng之間。

Q8: 在進(jìn)行 Lonza 細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè) (BET)、LAL 或 PyroGene™ 重組因子 C (rFC) 內(nèi)毒素檢測(cè)試驗(yàn)時(shí)，是否應(yīng)該使用匹配的試劑、CSE？

A8: 您需要使用匹配的試劑，以符合 FDA 對(duì)內(nèi)毒素檢測(cè)的要求。龍沙的每批 LAL 都使用標(biāo)準(zhǔn) EC-6 進(jìn)行功能測(cè)試。然后，通過與參考標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素（RSE）平行測(cè)試，將該批次 LAL 與我們的對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素（CSE）進(jìn)行 "匹配"。這種 RSE/CSE 相關(guān)性檢測(cè)可確定該批次 CSE 與該批次 LAL 一起使用時(shí)的效力。RSE/CSE 相關(guān)性測(cè)定的程序摘自美國(guó)食品及藥物管理局（FDA）關(guān)于將嗜酸性卵母細(xì)胞裂解物檢測(cè)法確認(rèn)為人和動(dòng)物腸外藥品、生物制品和醫(yī)療器械最終產(chǎn)品內(nèi)毒素檢測(cè)法的指導(dǎo)原則。FDA 指出，使用 LAL 生產(chǎn)商出具的質(zhì)量證書，企業(yè)就無需自行進(jìn)行 RSE/CSE 比對(duì)。龍沙提供的試劑盒包含適用于我們所有檢測(cè)類型的匹配試劑，使您的內(nèi)毒素檢測(cè)更簡(jiǎn)單。

Q9: 準(zhǔn)備運(yùn)行 Lonza 細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒 (BET)、LAL 或 PyroGene™ 重組因子 C (rFC) 時(shí)，如何確定 CSE 的效力？

A9: 龍沙確定 CSE 效力的 RSE/CSE操作見每種匹配試劑盒的CoA。一般來說，將多瓶 CSE 的內(nèi)毒素稀釋液與用 RSE 生產(chǎn)的一系列標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行未知物測(cè)試。將 CSE 稀釋液的結(jié)果與 RSE 的結(jié)果進(jìn)行比較計(jì)算，得出以 EU/ml 為單位的效力。對(duì)于凝膠法，終點(diǎn)的稀釋倍數(shù)的幾何平均數(shù)乘以靈敏度，即可確定以 EU/ml 為單位的效價(jià)。對(duì)于定量方法，對(duì)結(jié)果在所測(cè) RSE 標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)的稀釋液進(jìn)行平均，以確定以 EU/ml 為單位的效價(jià)。要計(jì)算每納克的效價(jià)，效價(jià)要乘以復(fù)溶CSE 所用的體積（例如 5 ml）和每個(gè)小瓶中凍干的相應(yīng)ng內(nèi)毒素。得出 EU/ng。

Q10: 在進(jìn)行 Lonza 細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè) (BET)、LAL 或 PyroGene™ 重組因子 C (rFC) 內(nèi)毒素檢測(cè)試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)該如何處理 LAL 試劑？

A10: LAL 試劑應(yīng)輕拿輕放。復(fù)溶后，輕輕倒置或旋轉(zhuǎn)試劑瓶，試劑瓶中的內(nèi)容物很容易溶解。渦旋或劇烈搖晃重組的 LAL 試劑會(huì)使其起泡，不利于內(nèi)毒素檢測(cè)。