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重組蛋白純化是生物制藥過程中的關(guān)鍵步驟，其目的在于從復雜的生物混合物中提取出高純度的目標蛋白。重組蛋白純化的工藝過程涉及多個階段，以下是對這些階段的詳細介紹：
1.樣品準備
預處理：在準備好所有設(shè)備及耗材后，對目的蛋白進行預處理，去除雜質(zhì)、組織、脂肪等，保證樣品的生物活性。
裂解細胞：如果目標蛋白存在于細胞內(nèi)，需要通過機械或化學方法裂解細胞，釋放出目標蛋白。
2.初步分離
離心：利用離心技術(shù)將大部分細胞碎片和未破裂的細胞分離出去。
過濾：通過過濾器進一步去除較大的雜質(zhì)顆粒。
3.層析法純化
離子交換色譜：基于蛋白質(zhì)表面的電荷差異進行分離。
凝膠色譜：根據(jù)蛋白質(zhì)分子的大小和形狀進行分離。
親和色譜：利用特異性配體與目標蛋白之間的親和力進行分離。
疏水相互作用色譜：基于蛋白質(zhì)表面疏水性區(qū)域的差異進行分離。
4.中間純化步驟
捕獲步驟：濃縮目的蛋白，使其與有害的、宿主細胞衍生組分（如蛋白酶）分離，避免使目的蛋白發(fā)生降解。
洗滌步驟：在洗脫前采用洗滌步驟減少雜質(zhì)數(shù)量。
5.精純步驟
去除痕量雜質(zhì)：使用陰離子交換或帶陰離子基團的多模式層析幫助清除帶負電荷的雜質(zhì)，如DNA、病毒及前兩個步驟中未去除的與產(chǎn)品有關(guān)的其他雜質(zhì)。
6.驗證運行
評估純化效果：對經(jīng)過純化處理的樣品進行評估，包括純度、收率等指標的檢測。
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