手機版
化工儀器網手機版
化工儀器網小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
以下是基因編輯轉染試劑盒的一般操作指南：
實驗前準備
細胞培養(yǎng)：選擇合適的細胞株，用相應的培養(yǎng)基在適宜條件（如37℃、5%CO?培養(yǎng)箱）下培養(yǎng)。每天觀察細胞生長狀態(tài)，當細胞達到70%-80%融合度時，可用于轉染。
試劑與材料準備：根據實驗需求準備好基因編輯轉染試劑盒、要轉染的DNA或RNA、無血清培養(yǎng)基、細胞培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿等。檢查試劑盒中各組分是否齊全，有無變質、沉淀等異常情況。
DNA或RNA準備：使用相應試劑盒提取或合成目的DNA或RNA。通過納米滴光度計測定其濃度和純度，確保濃度合適，且DNA或RNA無蛋白質、RNA和其他化學物質污染。
轉染操作
轉染復合物制備
在無菌離心管中，加入適量無血清培養(yǎng)基，再加入一定量的轉染試劑，輕輕混勻，室溫孵育5分鐘。
在另一無菌離心管中，用無血清培養(yǎng)基稀釋適量的DNA或RNA。
將稀釋后的DNA或RNA加入到含有轉染試劑的離心管中，輕輕混勻，室溫下孵育15-30分鐘，使轉染試劑與DNA或RNA形成穩(wěn)定的轉染復合物。
轉染前細胞準備：轉染復合物孵育期間，對細胞進行處理。對于貼壁細胞，用胰蛋白酶消化細胞，加入含有血清的培養(yǎng)基終止消化，離心收集細胞，用無血清培養(yǎng)基重懸細胞并計數，調整細胞密度至合適濃度；對于懸浮細胞，直接離心收集細胞，用無血清培養(yǎng)基重懸并調整細胞密度。
細胞轉染：將制備好的轉染復合物加入到含有細胞的培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中，輕輕搖勻或晃動，使轉染復合物均勻分布在細胞周圍。然后將培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿放回培養(yǎng)箱中，按照細胞培養(yǎng)條件繼續(xù)培養(yǎng)。
轉染后處理
培養(yǎng)條件調整：轉染后4-6小時，檢查細胞狀態(tài)，若細胞狀態(tài)良好，可更換為含有血清的培養(yǎng)基，為細胞提供營養(yǎng)，促進細胞恢復和生長。
觀察與檢測
細胞形態(tài)觀察：轉染后24小時內，使用倒置顯微鏡觀察細胞，記錄細胞形態(tài)變化，注意是否有細胞脫落、聚集等異常情況。
轉染效率評估：根據轉染的基因是否帶有熒光標記等，在轉染后24-48小時，使用熒光顯微鏡觀察并計算熒光陽性細胞的比例；或通過流式細胞儀分析熒光信號，確定轉染細胞的比例；也可在轉染后24-48小時提取總RNA或總蛋白，通過PCR、WesternBlot等方法檢測目的基因的表達情況。
在操作過程中要嚴格遵守無菌操作原則，避免微生物污染。同時，不同品牌和型號的基因編輯轉染試劑盒可能在具體操作步驟和要求上存在差異，務必詳細閱讀試劑盒的說明書，并根據實驗實際情況進行優(yōu)化和調整。
相關產品
免責聲明
- 凡本網注明“來源：化工儀器網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源（非化工儀器網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。
采購中心