鐵（分子量55.845克/摩爾）是一種在所有已知生物體的各種代謝過(guò)程中都不可少的元素。其中最重要的過(guò)程包括電子傳遞、氧氣運(yùn)輸和DNA合成。鐵最常見(jiàn)的存在形式是鐵-硫中心和各種血紅素。與其他大多數(shù)通過(guò)吸收和排泄來(lái)調(diào)節(jié)水平的離子不同，體內(nèi)的鐵水平僅通過(guò)吸收過(guò)程來(lái)控制。AkrivisBio的鐵檢測(cè)試劑盒是一種簡(jiǎn)單直接的方法，用于測(cè)定樣本中的亞鐵離子（Fe2?）。在檢測(cè)中，樣本中存在的鐵化合物可以選擇性地被還原為亞鐵形式（Fe2?），然后與FereneS反應(yīng)生成一個(gè)在593納米處具有最大吸收峰的穩(wěn)定色素。通過(guò)添加一種添加劑來(lái)防止銅的干擾。該檢測(cè)適用于多種樣本中鐵含量在0到10納摩爾范圍內(nèi)的測(cè)定。

艾美捷鐵測(cè)定試劑盒：

貨號(hào)：MA-0103

規(guī)格：100孔

樣本類型：細(xì)胞或組織裂解液、血清

適用物種：通用（適用于所有物種）

檢測(cè)方法：比色法，檢測(cè)波長(zhǎng)593納米

檢測(cè)類型：定量

應(yīng)用：基于微孔板的比色法檢測(cè)，用于測(cè)量樣本中鐵含量（0-10納摩爾）。

檢測(cè)范圍：0-10納摩爾

儲(chǔ)存條件：+4°C

運(yùn)輸條件：凝膠冷藏包

鐵測(cè)定試劑盒檢測(cè)組分：

-檢測(cè)緩沖液：25毫升，貨號(hào)WMMA-0103A

-鐵還原劑：0.7毫升，綠色，貨號(hào)MA-0103B

-FereneS：12毫升，貨號(hào)NMMA-0103C

-Fe3?標(biāo)準(zhǔn)品（100mM）：0.1毫升，黃色，貨號(hào)MA-0103D

鐵測(cè)定試劑盒檢測(cè)原理：

1.鐵化合物被溶解，使所有Fe2?和Fe3?都可用。Cu2?被螯合以去除干擾。

2.可選擇性地添加還原劑將Fe3?轉(zhuǎn)化為Fe2?（總鐵）或省略（僅還原鐵，Fe2?）。

3.添加FereneS形成色素。

儲(chǔ)存和處理：

將試劑盒儲(chǔ)存于4°C。使用前將所有組分恢復(fù)至室溫?；旌翔F還原劑以溶解在冷凍過(guò)程中可能形成的任何沉淀。打開(kāi)試劑瓶前請(qǐng)短暫離心。

檢測(cè)步驟：

1.鐵標(biāo)準(zhǔn)曲線：將10微升100mM的鐵標(biāo)準(zhǔn)品用990微升去離子水稀釋，生成1mM的鐵標(biāo)準(zhǔn)品。將稀釋后的鐵標(biāo)準(zhǔn)品0、2、4、6、8和10微升分別加入96孔板中，生成每孔0、2、4、6、8和10納摩爾的鐵標(biāo)準(zhǔn)品。向每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入5微升鐵還原劑，并用鐵檢測(cè)緩沖液將所有標(biāo)準(zhǔn)品孔的體積調(diào)整至100微升。

2.樣本測(cè)試：

-a.可以直接測(cè)試液體樣本（如血清）中的亞鐵（Fe2?）、總鐵（Fe2?+Fe3?）或鐵（Fe3?）。每孔最多可加入50微升血清。正常血清中鐵水平約為10-40微摩爾。軟組織或細(xì)胞可以用5-10倍體積的鐵檢測(cè)緩沖液（例如，每100毫克濕組織或約5×10?細(xì)胞用500微升鐵檢測(cè)緩沖液）進(jìn)行勻漿。用探針超聲儀或Dounce玻璃珠勻漿器充分勻漿組織樣本，然后以16,000×g離心10分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移至新的微量離心管中。所有最終讀數(shù)應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。如果任何樣本超出該范圍，應(yīng)適當(dāng)稀釋并重新運(yùn)行。

-b.僅檢測(cè)亞鐵（Fe2?）：將1-50微升樣本加入96孔板的樣本孔中，并用鐵檢測(cè)緩沖液將體積調(diào)整至每孔100微升。檢測(cè)總鐵（Fe2?+Fe3?）：將1-50微升樣本加入96孔板的樣本孔中。向每個(gè)樣本中加入5微升鐵還原劑，將Fe3?還原為Fe2?。用鐵檢測(cè)緩沖液將體積調(diào)整至每孔100微升。

-c.在37°C下，讓Fe3?w全還原為Fe2?，持續(xù)30分鐘。

-d.向含有鐵標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣本的每個(gè)孔中加入100微升鐵探針。充分混合。在37°C下，避光讓顏色w全顯色，持續(xù)60分鐘。

3.測(cè)量：在微孔板讀數(shù)器上監(jiān)測(cè)593納米處的吸光度。

4.典型結(jié)果：

5.計(jì)算：從所有其他標(biāo)準(zhǔn)品和樣本讀數(shù)中減去零標(biāo)準(zhǔn)品的讀數(shù)。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。確定標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。將背景校正后的樣本讀數(shù)除以標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，以獲得每孔中的鐵納摩爾數(shù)。測(cè)試樣本中的Fe2?和總鐵（Fe2?+Fe3?）直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線確定。測(cè)試樣本中的Fe3?含量通過(guò)從總鐵（Fe2?+Fe3?）中減去Fe2?來(lái)計(jì)算。通過(guò)以下方法確定原始樣本中的Fe2?、Fe3?或總鐵（Fe2?+Fe3?）濃度：

-A.將每孔的納摩爾數(shù)除以加入孔中的樣本體積（微升）=每微升樣本中的鐵納摩爾數(shù)

-B.將每微升樣本中的鐵納摩爾數(shù)乘以上述2a中上清液的總體積=每樣本中的總鐵納摩爾數(shù)

-C.將每樣本中的總鐵納摩爾數(shù)除以用于制備樣本的組織毫克數(shù)或細(xì)胞數(shù)量=每毫克組織（或每細(xì)胞數(shù)量等）中的鐵納摩爾數(shù)