一、細(xì)胞分離液的工作原理?

細(xì)胞分離液是一種基于密度梯度離心原理設(shè)計的介質(zhì)，常用成分包括聚蔗糖（如Ficoll）或硅膠顆粒（如Percoll）。不同細(xì)胞因大小、密度和沉降系數(shù)差異，在離心過程中分層，從而被精準(zhǔn)分離。

例如：外周血單個核細(xì)胞（PBMC）?可通過Ficoll分離液與紅細(xì)胞、粒細(xì)胞區(qū)分；

腫瘤細(xì)胞?可通過特殊配方的分離液從組織碎片中富集。

二、細(xì)胞分離液的標(biāo)準(zhǔn)操作流程?

1. 樣本準(zhǔn)備?

血液樣本需抗凝處理（如EDTA抗凝），組織樣本需機械破碎或酶消化成單細(xì)胞懸液。

過濾去除大顆粒雜質(zhì)（推薦70 μm濾網(wǎng)）。

2. 配制分離液?

根據(jù)樣本類型選擇合適密度的分離液（如Ficoll-1077用于人PBMC分離）。

保持低溫（2-8℃）保存，使用前恢復(fù)至室溫，避免溫度波動影響密度梯度。

3. 梯度離心?

將樣本緩慢疊加在分離液上層，保持分層清晰（傾斜移液管沿管壁緩慢加入）。

離心參數(shù)優(yōu)化：通常400-800×g離心20-30分鐘，具體根據(jù)試劑說明調(diào)整。?離心機升/降速建議設(shè)置為“低加速度”?，避免破壞分層界面。

4. 目標(biāo)細(xì)胞收集?

離心后，目標(biāo)細(xì)胞集中于分離液與血漿/培養(yǎng)基的交界層（如PBMC位于Ficoll上層）。

使用無菌吸管輕柔吸取細(xì)胞層，轉(zhuǎn)移至新管后用PBS洗滌2-3次，去除殘留分離液。

三、細(xì)胞分離液的五大核心優(yōu)勢?

高純度與高活性?

非特異性吸附低，細(xì)胞存活率可達(dá)95%以上，且表面抗原完整性保持良好，適用于流式分析和原代培養(yǎng)。

操作簡便高效?

單次離心即可完成分離，30分鐘內(nèi)獲得目標(biāo)細(xì)胞，顯著提升實驗效率。

廣泛適用性?

覆蓋多種樣本類型：血液、組織、骨髓、腹水等；兼容T/B細(xì)胞、干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等多種細(xì)胞類型。

可重復(fù)性高?

標(biāo)準(zhǔn)化試劑和流程確保實驗結(jié)果穩(wěn)定，減少批次間差異。

低交叉污染風(fēng)險?

化學(xué)惰性成分避免與細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，尤其適合稀有細(xì)胞分選（如循環(huán)腫瘤細(xì)胞）。

四、關(guān)鍵注意事項與常見問題?

1. 嚴(yán)格避免污染?

實驗全程需在超凈臺內(nèi)操作，分離液開封后需密封保存，防止微生物污染。

注意：? 血液樣本需按生物安全二級（BSL-2）標(biāo)準(zhǔn)處理。

2. 精準(zhǔn)控制離心條件?

離心力過高會導(dǎo)致細(xì)胞擠壓損傷，過低則分層不徹-底。建議預(yù)先進行離心參數(shù)優(yōu)化實驗。

3. 選擇適配的分離液類型?

高密度細(xì)胞（如紅細(xì)胞）選擇Percoll梯度液；低密度細(xì)胞（如PBMC）選擇Ficoll體系。

商品化分離液（如STEMCELL品牌）常針對特定細(xì)胞優(yōu)化，可優(yōu)先考慮。

4. 溫度與時間控制?

離心前樣本與分離液需平衡至室溫，低溫會增加液體粘度導(dǎo)致分層異常。

細(xì)胞收集后需在1小時內(nèi)進行后續(xù)實驗，避免活性下降。

5. 質(zhì)量驗證?

分離后建議采用臺盼藍(lán)染色評估細(xì)胞活性，流式細(xì)胞術(shù)檢測純度（如CD45+標(biāo)記PBMC）。