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SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳說明書

來源:上海一基實業(yè)有限公司   2015年07月11日 09:44  

             SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(血紅蛋白的分離試劑盒)
產(chǎn)品簡介:
在本試劑盒中,聚丙烯酰胺凝膠由丙烯酰胺(簡稱 Acr)單體和少量交聯(lián)劑甲叉
雙丙烯酰胺(簡稱 Bis)通過化學催化劑(過硫酸銨)、四甲基乙二胺(TEMED)作為加速
劑形成三維空間的高聚物。SDS 能夠使蛋白質(zhì)復合體解離,并能夠去除蛋白質(zhì)所帶
電荷對其遷移率的影響,從而使蛋白質(zhì)遷移率*反映出單條肽鏈的分子量大小。
蛋白樣品可通過聚丙烯酰胺凝膠電泳,得到分離,并能根據(jù)蛋白質(zhì)條帶的位置確定
其分子量。本試劑盒具有方便,快捷的特點。
試劑盒規(guī)格:
8cm×7cm×1mm 厚的凝膠 3 塊。
試劑盒內(nèi)容:

操作步驟:
1. 打開試劑盒,依照說明書清點各種試劑;
2. 配制 30%的丙烯酰胺混合液:將試劑盒中提供的 Acr 與 Bis 固體混合物加
蒸餾水 10mL,混勻后,在冰箱中 4℃避光保存;
3. 配制 10%SDS:將試劑盒中提供的 SDS 固體加 1mL 蒸餾水;
4. 配制 10%過硫酸銨溶液(現(xiàn)配現(xiàn)用):將試劑盒中提供的過硫酸銨固體加
蒸餾水 1mL,混勻后,在冰箱中 4℃保存;
5. 配制電泳緩沖液:將試劑盒中提供的 Tris-甘氨酸混合物加蒸餾水至 1500
mL 混勻;
6. 配制脫色液:在 500 mL 蒸餾水中依次加入甲醇 400mL,乙酸 100mL;
7. 配制染色液:將試劑盒中提供的染料固體(考馬斯亮藍 G250)加入 200mL
脫色液中混勻,濾紙過濾;

* 配置好的染色液可反復使用。
8. 分離膠配置(配制 1 塊膠用量):在燒杯中依次加入水 1.6mL,30%的丙烯
酰胺混合液 2.0mL,1.5mol/LTris 溶液(pH8.8)1.3mL,10%的 SDS 50μL,10%過硫
酸銨 50μL,TEMED 2μL;
9. 濃縮膠配置(配制 1 塊膠用量):在燒杯中依次加入水 2.1mL,30%的丙烯
酰胺混合液 0.5mL,1.0mol/LTris 溶液(pH6.8)0.38mL,10%的 SDS 30μL,10%過硫
酸銨 30μL,TEMED 3μL;
10. 樣品制備:10μL 的蛋白樣品與 10μL 的 2×加樣緩沖液混勻后,至于沸水中
5~10 分鐘,加入點樣孔進行電泳;
11. 實驗操作詳見人教社生物技術實踐(選修一)光盤中的《血紅蛋白的提取和分
離》部分。

儲存條件:
本試劑盒置于 4℃冰箱保存 3 個月。(注:2×加樣緩沖液需要放在-20℃保存。)

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