兔子C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)

　　BS-4223  兔子C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒

　　以下是天津本生?兔子C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒?的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)操作說(shuō)明：

　　一、檢測(cè)原理?

　　采用?雙抗體夾心法?：

　　包被抗兔CRP抗體捕獲樣本中的CRP;

　　加入生物素化抗體形成復(fù)合物，再結(jié)合HRP標(biāo)記鏈霉親和素;

　　TMB顯色，OD450nm吸光度值與CRP濃度正相關(guān)。

　　二、試劑盒組成?

　　組分 保存條件 規(guī)格與備注

　　預(yù)包被微孔板 4℃干燥 96孔(可拆卸)

　　CRP標(biāo)準(zhǔn)品 -20℃(凍干粉) 濃度梯度：39-5000 ng/mL

　　HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體 4℃避光 含辣根過(guò)氧化物酶

　　TMB顯色液A/B 4℃避光 現(xiàn)配現(xiàn)用

　　終止液 室溫 顯色終止

　　20×濃縮洗滌液 室溫 使用前稀釋

　　三、樣本處理?

　　血清/血漿?：

　　全血室溫靜置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，離心(1000×g，20分鐘)取上清;

　　避免溶血或反復(fù)凍融。

　　組織勻漿?：

　　按重量比加入PBS勻漿，離心(3000 rpm，10分鐘)取上清。

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清?：直接離心去除沉淀。

　　四、實(shí)驗(yàn)步驟?

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：

　　凍干標(biāo)準(zhǔn)品用稀釋液復(fù)溶，梯度稀釋為2500 ng/mL至39 ng/mL。

　　加樣與孵育?：

　　每孔加入50μL樣本或標(biāo)準(zhǔn)品，37℃孵育30分鐘;

　　洗滌5次(手動(dòng)或自動(dòng)洗板機(jī))。

　　顯色與檢測(cè)?：

　　加入TMB顯色液(A/B各50μL)，避光反應(yīng)15分鐘;

　　加終止液50μL，立即450nm測(cè)OD值。

　　五、數(shù)據(jù)分析?

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線(xiàn);

　　樣本濃度=曲線(xiàn)對(duì)應(yīng)值×稀釋倍數(shù)。

　　六、注意事項(xiàng)?

　　質(zhì)量控制?：

　　空白孔OD值應(yīng)<0.1，板內(nèi)變異系數(shù)<10%;

　　避免NaN3污染(抑制HRP活性)。

　　保存條件?：

　　未開(kāi)封試劑盒2-8℃保存6個(gè)月，開(kāi)封后盡快使用。

　　七、常見(jiàn)問(wèn)題?

　　邊緣效應(yīng)?：溫育時(shí)使用水浴或預(yù)熱板/試劑至37℃以消除;

　　無(wú)信號(hào)?：檢查酶標(biāo)抗體活性及洗滌是否。

　　BS-4223兔子C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒 天津本生

　　注：以上資料僅供參考，不作為實(shí)際應(yīng)用。如需具體品牌試劑盒的差異操作(如本生、天正信達(dá)等)，建議參考對(duì)應(yīng)說(shuō)明書(shū)。

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